本指導(dǎo)原則旨在指導(dǎo)注冊申請人對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑注冊申報資料的準備及撰寫，同時也為技術(shù)審評部門對注冊申報資料的技術(shù)審評提供參考。
本指導(dǎo)原則是對地中海貧血相關(guān)基因檢測試劑的一般要求，申請人應(yīng)依據(jù)產(chǎn)品的具體特性確定其中內(nèi)容是否適用，若不適用，需具體闡述理由及相應(yīng)的科學依據(jù)，并依據(jù)產(chǎn)品的具體特性對注冊申報資料的內(nèi)容進行充實和細化。
本指導(dǎo)原則是對申請人和審查人員的指導(dǎo)性文件，但不包括注冊審批所涉及的行政事項，也不作為法規(guī)強制執(zhí)行，如果有能夠滿足相關(guān)法規(guī)要求的其他方法，也可以采用，但需要提供詳細的研究和驗證資料，相關(guān)人員應(yīng)在遵循法規(guī)的前提下使用本指導(dǎo)原則。
本指導(dǎo)原則是在現(xiàn)行法規(guī)和標準體系以及當前認知水平下制定的，隨著法規(guī)和標準的不斷完善以及科學技術(shù)的不斷發(fā)展，本指導(dǎo)原則相關(guān)內(nèi)容也將適時進行調(diào)整。
適用范圍
地中海貧血（簡稱地貧）是一種常染色體隱性遺傳病，是由于珠蛋白基因發(fā)生突變（包括點突變和缺失等），致使珠蛋白肽鏈合成減少或完全不能合成而導(dǎo)致的一組單基因遺傳性溶血性疾病，輕者可無臨床表現(xiàn)，重者以進行性溶血性貧血為主要特征。根據(jù)珠蛋白肽鏈合成受到抑制的類型，地貧分為α-，β-和γ-地貧等，臨床上最常見的是α-和β-地貧。地貧主要分布在地中海沿岸、東南亞和少數(shù)非洲地區(qū)，具有明顯的種族特性和地域分布差異。地貧是我國南方地區(qū)最常見、危害最大的遺傳病之一，尤以廣西、云南、廣東、海南、四川和貴州等省份為甚，云南、海南和廣東的地貧基因人群攜帶率可達10%以上，廣西更是達到了20%以上。
α-地貧主要是由于α-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起。α-珠蛋白基因簇位于16p13.3，包括胎兒期和成人期表達的2個基因（α2和α1），基因的排列順序為5’-α2-α1-3’。根據(jù)單倍型的情況，可將α地貧分為3類：（1）缺失型α+地貧（-α/），缺失1個α基因；（2）缺失型α0地貧（--/），2個α基因同時缺失；（3）非缺失型α+地貧（αTα/或ααT/ ），1個α1或α2基因發(fā)生點突變或少數(shù)幾個堿基的缺失。中國現(xiàn)已發(fā)現(xiàn)至少19種α-珠蛋白基因大片段缺失和38種α-珠蛋白基因點突變。其中，6 種α-珠蛋白基因的突變：--SEA/、-α3.7/、-α4.2/、αWSα/（HBA2：c.369C>G）、αQSα/（HBA2：c.377 T>C）；αCSα/（HBA2：c.427T>C）占患病人群總數(shù)的98%。
α-地貧基因型和臨床分型的關(guān)系已經(jīng)基本闡明。α-地貧的表型嚴重程度隨著功能性α-珠蛋白基因的減少而加重：（1）1個α-基因缺失或點突變（-α/αα或ααT/αα或αTα/αα），稱為靜止型α-地貧，通常不貧血，血液學表現(xiàn)為小細胞低色素；（2）2個α-基因缺失或復(fù)合-α基因點突變，或點突變，其基因型為--/αα或-α/-α或-α/ααT或αTα/-α或αTα/αTα，稱為輕型α-地貧，臨床表現(xiàn)為不貧血或輕度貧血，血液學檢查有小細胞低色素特征；（3）3個α-基因缺失或復(fù)合α基因點突變，基因型為--/-α或--/αTα，稱為中間型α-地貧，又稱Hb H病，患者有輕至重度貧血。某些基因型為αTα/αTα的病例（如αCSα/αCSα、αQSα/αQSα和αCSα/αQSα）也表現(xiàn)為Hb H病。通常，--/αTα的非缺失型 Hb H病較單純?nèi)笔?/span>Hb H?。?/span>--/-α）的臨床表現(xiàn)更為嚴重，特別是基因型為--/αCSα或--/αQSα的Hb H病患者，貧血程度較為嚴重；（4）4個α-基因缺失，其基因型為--/--，稱為重型α-地貧，又稱Hb Bart’s胎兒水腫綜合征，此類個體一般無法存活到出生或分娩后半小時內(nèi)死亡。
β-地貧是由于β-珠蛋白基因發(fā)生突變而引起，以點突變?yōu)橹?，少?shù)為缺失型。β-珠蛋白基因簇位于11p15.3，包括2個成人期表達基因（β和δ），基因的排列順序為5’-δ-β-3’。根據(jù)β-珠蛋白鏈合成量的程度，可將β-地貧分為3類：（1）β0地貧，β-珠蛋白鏈完全不能合成，其所在的等位基因稱為β0地貧等位基因；（2）β+地貧，β-珠蛋白鏈合成減少，其所在的等位基因稱為β+地貧等位基因；（3）β++地貧，又稱沉默型β-地貧，β-珠蛋白鏈合成輕微減少。中國已至少報道84種β-珠蛋白基因點突變和11種β-珠蛋白基因缺失。其中，6種點突變：HBB：c.126_129delCTTT，HBB：c.52A>T，HBB：c.-78A>G，HBB： c.79G>A，HBB： c.316-197C>T和HBB： c.216_217insA占了全部突變類型的90%以上。
β-地貧的臨床表型可分為4種：（1）靜止型β-地貧，基因型為β++/βN，血液學表型正?；蚺R界，一般只能通過分子診斷識別；（2）輕型β-地貧，基因型為β0/βN或β+/βN，臨床表現(xiàn)為小細胞低色素和HbA2值升高；（3）中間型β-地貧，基因型為β+/β+或β+/β0，表型變異范圍大，可從輕度貧血到中度貧血，多于幼兒期出現(xiàn)中度貧血；（4）重型β-地貧，基因型為β+/β0或β0/β0，通常伴有嚴重貧血，需要定期輸血才能存活?；純撼錾鷷r無癥狀，常于嬰兒期（3-12月齡）發(fā)病。如不治療，患兒多于5歲前死亡。此外，中間型的分子基礎(chǔ)較為復(fù)雜，顯性β-地貧突變的雜合子（βD/βN），合并α-地貧突變的β-地貧突變純合子（β0/β0），或合并α-珠蛋白三聯(lián)體的β-地貧突變雜合子（β0/βN或β+/βN），也會顯示中間型的表型。
2018年發(fā)布的《重型β-地中海貧血的診斷和治療指南》明確規(guī)定：對于重型β-地中海貧血的診斷，有條件者均應(yīng)進行基因診斷，基因型為純合子或雙重雜合子為確診本病的指標。2018年發(fā)布的《兒童非輸血依賴型地中海貧血的診治和管理專家共識》也明確規(guī)定：地貧基因檢測為非輸血依賴型地貧的診斷依據(jù)之一。
另外，國家衛(wèi)生健康委員會發(fā)布的相關(guān)文件要求：為減少重型地貧患兒出生，在我國地貧高發(fā)省份實施地貧防控試點項目。主要流程包括：（1）對新婚夫婦和計劃懷孕夫婦在懷孕前或孕期進行血常規(guī)初篩；（2）對夫婦一方或雙方血常規(guī)檢查結(jié)果陽性的夫婦進行血紅蛋白分析復(fù)篩；（3）對血紅蛋白分析復(fù)篩結(jié)果均為陽性的夫婦，取其抗凝靜脈全血進行相應(yīng)的α+β地貧基因檢測；（4）綜合夫婦雙方病史詢問、地貧篩查和基因檢測結(jié)果，判定為高風險夫婦。對高風險夫婦進行追蹤，及時了解受檢婦女懷孕情況，指導(dǎo)女方在懷孕后適宜時期接受產(chǎn)前診斷。產(chǎn)前診斷的對象為胎兒，樣本類型為胎兒的絨毛、羊水和臍帶血，檢測項目為相應(yīng)的地貧基因檢測。
綜上，結(jié)合該類產(chǎn)品臨床使用的實際情況，本指導(dǎo)原則的預(yù)期用途可為：用于體外定性檢測人外周靜脈全血或胎兒羊水等樣本中基因組DNA的α-和/或β-地貧相關(guān)基因，用于α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷），地貧高風險夫婦的評估，或胎兒的產(chǎn)前遺傳診斷等。
結(jié)合該類產(chǎn)品在中國注冊的實際情況以及當前的認知，本指導(dǎo)原則僅對“α-和/或β-地貧的輔助診斷（遺傳診斷）”預(yù)期用途的相關(guān)內(nèi)容進行了詳細闡述。針對其他預(yù)期用途，本指導(dǎo)原則僅對部分內(nèi)容進行了闡述，申請人應(yīng)根據(jù)產(chǎn)品特性，對本指導(dǎo)原則未涉及的內(nèi)容進行補充并做出相應(yīng)評價。
本指導(dǎo)原則的技術(shù)要求是基于PCR探針法方法建立的，對于其他分子生物學檢測技術(shù)（如：PCR-反向點雜交法和gap-PCR法等），可能部分要求不完全適用或本文所述技術(shù)指標不夠全面，申請人可以根據(jù)產(chǎn)品特性對不適用部分進行或補充其他的評價和驗證，但需闡述不適用的理由，并驗證替代方法的科學合理性。
本指導(dǎo)原則適用于進行首次注冊申報和相關(guān)許可事項變更的產(chǎn)品。
詳細內(nèi)容，見https://www.cmde.org.cn/CL0112/20612.html